| 1 | 免疫动物：选取健康新西兰兔一只。 |
|---|---|
| 2 | 佐剂：首先用完全弗氏佐剂（CFA），后用不完全弗氏佐剂（IFA）。 |
| 3 | 免疫原：蛋白或KLH偶联的多肽。每次免疫100-200μg免疫原。 |
| 4 | 免疫：用生理盐水稀释免疫原，然后与相应的佐剂进行1：1混合。抗原和佐剂完全混合形成稳定的乳剂，用注射器抽取抗原混合物，于兔子双肩皮下两点和双后腿肌肉两点注射抗原。每个区域大约1/4体积的免疫原。这样免疫原可以持久存在从而提高免疫应答。 |
| 5 | 取血：用19号针头对兔子进行耳动脉取血，室温过夜析出血清。 |
| 6 |
第1天 免1： 采5ml全血（可获得2-3ml免疫前血清）室温静置过夜，第二天离心后分装。用完全弗氏佐剂（CFA）混合的200μg抗原免疫兔子； 第15天 免2： 用完全弗氏佐剂（CFA）混合的200μg抗原免疫兔子； 第29天 免3： 用不完全弗氏佐剂（IFA）混合的100μg抗原免疫兔子； 第43天 采1：采全血5ml，进行ELISA或WB检测； 第44天 免4：用不完全弗氏佐剂（IFA）混合的100μg抗原免疫兔子；如采1 Elisa转阳则开始收集血清，采血30ml收集约15ml血清； 第58天 采2：如采1 Elisa未转阳仍然采小样（同采1），送实验室待检测结果； 第59，73天… 免5，采3：往后以此类推，间隔2周采血，如Elisa转阳则开始收集血清，转阳后的兔号共收集5次血清（总量70-80ml血清）后放血。 |
| 7 | 注意：在整个项目中，兔子需要保持10周的免疫和放血。检测的结果将决定这个项目的继续、修改或终止。 |
| 8 | 纯化：多肽亲和纯化抗体或Protein A/G 纯化抗体。 |
| 9 | 检测：抗体ELISA、WB、IHC和IF应用验证。 |
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