DAB染色液试剂盒

DAB Detection Kit

产品详情
实验流程

Product Information
Packing Specification	100人份/盒、300人份/盒、500人份/盒、1000人份/盒。
Intended Use	用于免疫组织化学染色的显色

Additional Information
Detection Principle	免疫显色试剂（酶标记羊抗小鼠/兔IgG聚合物）识别连接组织切片上的一抗；再加入DAB显色液，聚合物上的过氧化物酶可以催化DAB显色液中的底物分解，使联苯胺氧化变成联苯亚胺，使组织切片中一抗结合的抗原位点出现棕黄色着色。
Main Components	1.DAB染色液1（浓缩液）；2.DAB染色液2（缓冲液）；3.DAB染色液3（预处理液）；4.DAB染色液配制管本产品未提供如下试剂和耗材：二甲苯、乙醇（无水、95%、85%、70%）、去离子水、中性树胶、一抗、阳性质控片、苏木素染色液、缓冲液（PBS磷酸盐法）、抗原修复液、免疫显色试剂。
Storage	本产品2～8℃避光保存，不得冻存。产品有效期为12个月。使用时采取单支试剂即拿即用的原则，其余组份在2~8℃的冰箱保存。单支试剂使用后，应立即放回冰箱中。按说明书配制成的DAB显色液在2~8℃避光条件下保存，6小时内有效。
Sample Requirements	新鲜活检或10%中性福尔马林固定的病人组织，参照病理技术规范要求取材、固定（8-24小时为宜）、脱水、石蜡包埋并制成蜡块。组织切片厚度为3~5 µm黏附在防脱处理的玻片上，56~60℃烤片两个小时后，冷却至室温。如果切片在室温下（18~28℃）保存，为了良好地重现组织中抗原分布情况，要在1个月内完成染色。
Usage Method	1. 适用范围：本产品适用于手工试验，也适用于百道医疗FAIPSee-I全自动免疫组化染色仪等仪器。溶液配制：DAB显色液：在DAB染色液配制管中依次加入DAB 染色液2（缓冲液）1mL，DAB 染色液1（浓缩液）一滴（约50 µl），混匀。配制好的 DAB 显色液避光 2~8℃存放，6小时内有效； 2. 操作步骤：用于自动染色仪：将工作液放入染色仪相应容器内使用，试剂无需配制。用于手工试验： 1) 样本准备：将切片于60℃恒温箱中烤片2小时，室温保存备用。 2) 脱蜡与水化： a. 石蜡切片置于新鲜二甲苯中，浸泡15分钟x2次。 b. 石蜡切片依次置于梯度酒精中（100%, 95%, 85%，70%），每次3分钟。 c. 蒸馏水冲洗1次，PBS冲洗2次，每次3分钟。 3) 抗原修复：参照一抗说明书进行。 4) 内源性过氧化物酶灭活：甩掉多余液体，用免疫组化笔将组织圈住，加入1-3滴DAB染色液试剂盒3（预处理液）完全覆盖组织，室温孵育15分钟，PBS冲洗2次，每次3分钟。 5) 一抗及亚型对照抗体孵育：加入1-3滴即用型抗体或相应的亚型对照抗体完全覆盖组织，室温湿盒孵育60分钟。PBS冲洗3次，每次3分钟。 6) 二抗孵育：加入1-3滴免疫显色试剂（HRP酶标羊抗鼠/兔IgG聚合物）完全覆盖组织，室温湿盒孵育30分钟，PBS冲洗3次，每次3分钟。 7) DAB显色：去除PBS溶液，加入1-3滴新鲜配置的DAB显色液完全覆盖组织，依据颜色变化显色1-3分钟，蒸馏水冲洗终止显色。注意：配制好的DAB显色液需在6小时内使用，否则会影响显色效果。 8) 苏木素衬染：苏木素染色5分钟，PBS冲洗返蓝。 9) 脱水透明：依次浸泡梯度酒精 70%，85%，95% ，100% ，每次3分钟。二甲苯透明10分钟。 10) 封片：用中性树胶对样品进行封片。 11) 结果分析：光学显微镜下观察免疫组化染色结果，结果分析应由有资质的病理医师判断。
Explanation	1. 抗原修复条件，抗体孵育时间，抗体孵育温度及显色时间不合适均有可能得出错误的结果。 2. 在每一次染色过程中，必须有对照实验同时进行。 3. 实验操作正常情况下，若阴性对照出现阳性染色结果，则判为假阳性，该批实验数据无效。建议重新实验或联系试剂生产厂家排查原因。 4. 如果阳性组织对照不能显示适当的阳性染色，使用者应认为该批次测试样本的结果无效。 5. 若酶标羊抗鼠/兔IgG聚合物孵育温度过高或孵育时间过长，可能导致染色过强及背景染色。
Limitation	本试剂仅供体外诊断使用，免疫组化作为一种多步骤的实验技术手段，组织的固定处理方式，切片厚度，试剂的选择中的任一环节的不当操作都有可能影响染色结果。