免疫显色试剂（双染 B 型）

产品详情
实验流程

Product Information
Packing Specification	10 人份/盒、60 人份/盒、100 人份/盒
Intended Use	在免疫组化反应中与抗原抗体结合，通过染色，将靶点进行标记。

Additional Information
Detection Principle	免疫显色试剂（HRP 酶标记的羊抗兔聚合物或 AP 酶标记的羊抗鼠聚合物）识别连接组织切片上的一抗；再通过 DAB 显色系统及 AP-Red 显色系统进行显色，使组织切片中一抗结合的抗原位点出现特异性着色。本产品可在同一张组织切片上同时显示两种抗原的表达，以发现其定位、形态和功能上的相互关系。
Main Components	由过氧化物酶封闭液、HRP 酶标羊抗兔 IgG 聚合物、AP 酶标羊抗鼠 IgG 聚合物、AP-Red 浓缩液、AP-Red 缓冲液、DAB 浓缩液、DAB 缓冲液及苏木素组成
Storage	本产品 2～8℃避光保存，产品有效期为 5 个月，不得冻存。使用时采取单支试剂即拿即用的原则，其余组份在 2~8℃的冰箱保存。按说明书配制成的 DAB 显色液、AP 显色液在 2~8℃避光条件下保存。（采用泡沫箱加冰袋密封的运输方式，时间不大于 7天，开箱温度不超过 30℃，产品性能无影响。）
Sample Requirements	新鲜活检或 10%中性福尔马林固定的病人组织，参照病理技术规范要求取材、固定（8-24 小时为宜）、脱水、石蜡包埋并制成蜡块。建议组织切片厚度为 3~5 µm，室温下保存并于 10 天内完成实验检测，以确保组织中抗原分布情况的良好重现
Usage Method	1. 准备工作： 1) 仪器设备：电磁炉，不锈钢高压锅，孵育盒，计时器，免疫组化笔，移液器，染色架，盖玻片，洗瓶，光学显微镜等； 2) 溶液配制： DAB 显色液：将 DAB 浓缩液与 DAB 缓冲液按 1：20 的比例混匀。配制好的 DAB 显色液避光 2~8℃存放，6 小时内有效； AP 显色液：将 AP-Red 浓缩液与 AP-Red 缓冲液按 1：50 的比例混匀。配制好的 AP 显色液避光 2~8℃存放，20 分钟内有效； 3) 反应温度：室温（18℃~37℃）； 2. 操作步骤： 1) 样本准备：将切片于 60℃恒温箱中烤片 2 小时，室温保存备用。 2) 脱蜡与水化： a. 石蜡切片置于新鲜二甲苯中，浸泡 15 分钟 x2 次。 b. 石蜡切片依次置于梯度酒精中（100%，95%，85%，70%），每次 3 分钟。 c. 纯化水冲洗 1 次，PBS 冲洗 2 次，每次 3 分钟。 3) 抗原修复：推荐使用 EDTA/柠檬酸高压热修复法（具体修复液 pH 值请参考一抗说明书），将水化后的组织切片置于抗原修复盒内，放入提前加热的高压锅中，盖上锅盖继续加热从高压锅喷气开始计时 3 分钟，计时结束后取下高压锅用自来水冲淋降压，自然冷却至室温。PBS 冲洗 2 次，每次 3 分钟。 4) 内源性过氧化物酶灭活：甩掉多余液体，用免疫组化笔将组织圈住，加入 1-3 滴过氧化物酶封闭液完全覆盖组织，室温孵育 10 分钟，PBS 冲洗 2 次，每次 3 分钟。 5) 兔单抗抗体/亚型对照抗体孵育：加入 1-3 滴即用型抗体或相应的亚型对照抗体完全覆盖组织，37℃湿盒孵育 60 分钟。PBS 冲洗 3 次，每次 3 分钟。 6) 二抗孵育：加入 1-3 滴 HRP 酶标羊抗兔 IgG 聚合物试剂完全覆盖组织，37℃湿盒孵育 30 分钟，PBS 冲洗 3 次，每次 3 分钟。 7) DAB 显色：加入 1-3 滴新鲜配制的 DAB 显色液完全覆盖组织，依据颜色变化显色 1-3 分钟，蒸馏水冲洗终止显色。 8) 洗脱修复：推荐使用 EDTA/柠檬酸高压热修复法（具体修复液 pH 值请参考一抗说明书），将水化后的组织切片置于抗原修复盒中，放入提前加热的高压锅中，盖上锅盖继续加热从高压锅喷气开始计时 3 分钟，计时结束后取下高压锅用自来水冲淋降压，自然冷却至室温。PBS 冲洗 2 次，每次 3 分钟。 9) 内源性过氧化物酶灭活：甩掉多余液体，用免疫组化笔将组织圈住，加入 1-3 滴过氧化物酶封闭液完全覆盖组织，室温孵育 10 分钟，PBS 冲洗 2 次，每次 3 分钟。 10) 鼠单抗抗体/亚型对照抗体孵育：加入 1-3 滴即用型抗体或相应的亚型对照抗体完全覆盖组织，37℃湿盒孵育 60 分钟。PBS 冲洗 3 次，每次 3 分钟。 11) 二抗孵育：加入 1-3 滴 AP 酶标羊抗鼠 IgG 聚合物试剂完全覆盖组织，37℃湿盒孵育 30 分钟，PBS 冲洗 3 次，每次 3 分钟。 12) AP 显色：加入 1-3 滴新鲜配制的 AP 显色液完全覆盖组织，依据颜色变化显色 10-15 分钟，蒸馏水冲洗终止显色。 13) 苏木素衬染：苏木素染色 1-2 分钟，PBS 冲洗返蓝。 14) 封片：用蒸馏水冲洗后，风干；中性树胶对样品进行封片。 15) 结果分析：光学显微镜下观察免疫组化染色结果，结果分析应由有资质的病理医师判断。
Explanation	1. 抗原修复条件、抗体孵育时间及温度、二抗孵育间及温度以及显色时间不合适均有可能得出错误的结果。2. 在每一次染色过程中，必须有对照实验同时进行。3. 实验操作正常情况下，若阴性对照出现阳性染色结果，则判为假阳性，该批实验数据无效。建议重新实验或联系试剂生产厂家排查原因。4. 如果阳性组织对照不能显示适当的阳性染色，使用者应认为该批次测试样本的结果无效
Limitation	本试剂仅供体外诊断使用，免疫组化作为一种多步骤的实验技术手段，组织的固定处理方式，切片厚度，试剂的选择中的任一环节的不当操作都有可能影响染色结果。