免疫显色试剂

Goat anti-mouse/rabbit IgG HRP polymer

产品详情
实验流程

Product Information
Description	反应敏感，高效放大一抗信号；染色清晰，无非特异背景染色质量稳定，无色原沉渣现象
Packing Specification	100人份/盒、300人份/盒、500人份/盒、1000人份/盒。
Intended Use	在免疫组化反应或原位杂交反应中与首要抗原抗体结合，通过染色，将靶点进行标记。

Additional Information
Detection Principle	免疫显色试剂（酶标记羊抗小鼠/兔IgG聚合物）识别连接组织切片上的一抗；再加入DAB显色液，聚合物上的过氧化物酶可以催化DAB显色液中的底物分解，使联苯胺氧化变成联苯亚胺，使组织切片中一抗结合的抗原位点出现棕色着色。
Main Components	纯水≥95%、牛血清白蛋白≤1.0%、氯化钠≤0.9%、HRP酶标羊抗鼠/兔IgG
Storage	本产品2~8℃储存，有效期为12个月。
Sample Requirements	新鲜活检或外科样本组织，中性福尔马林固定，固定时间8~24小时，参照病理技术规范要求要求取材、脱水、石蜡包埋并制成蜡块。组织切片厚度为3~5 µm黏附在防脱处理的玻片上，56~60℃烤片两个小时后，冷却至室温。如果切片在室温下（18~28℃）保存，为了良好地重现组织中抗原分布情况，要在2个月内完成染色。
Usage Method	1. 准备工作： 1) 仪器设备：电磁炉，不锈钢高压锅，孵育盒，计时器，免疫组化笔，移液器，染色架，盖玻片，洗瓶，光学显微镜； 2) 溶液配制：各溶液的配制可参见相关说明书； 3) 反应温度：室温（18℃~28℃）； 2. 操作步骤： 1) 样本准备：将切片于60℃恒温箱中烤片2小时，室温保存备用。 2) 脱蜡与水化： a. 石蜡切片置于新鲜二甲苯中，浸泡15分钟x2次。 b. 石蜡切片依次置于梯度酒精中（100%, 95%, 85%，70%），每次3分钟。 c. 蒸馏水冲洗1次，PBS冲洗2次，每次3分钟。 3) 抗原修复：参照一抗说明书进行。 4) 内源性过氧化物酶灭活：甩掉多余液体，用免疫组化笔将组织圈住，应用 3% H2O2溶液对切片进行室温孵育15分钟，PBS冲洗2次，每次3分钟。 5) 一抗及亚型对照抗体孵育：加入1-3滴即用型抗体或相应的亚型对照抗体完全覆盖组织，37℃（或室温）湿盒孵育60分钟。PBS冲洗3次，每次3分钟。 6) 二抗孵育：加入1-3滴免疫显色试剂（HRP酶标羊抗鼠/兔IgG聚合物）完全覆盖组织，37℃（或室温）湿盒孵育30分钟，PBS冲洗3次，每次3分钟。 7) DAB显色：加1滴DAB显色原到1mL DAB缓冲液（高对比度）中，依据颜色变化显色1-3分钟，蒸馏水冲洗终止显色。注意：配制好的DAB显色液需在6小时内使用，否则会影响显色效果。 8) 苏木素衬染：苏木素染色5分钟，PBS冲洗返蓝。 9) 脱水透明：依次浸泡梯度酒精 70%，85%，95% ，100% ，每次3分钟。二甲苯透明10分钟。 10) 封片：用中性树胶对样品进行封片。 11) 结果分析：光学显微镜下观察免疫组化染色结果，结果分析应由有资质的病理医师判断。
Explanation	1. 抗原修复条件，抗体孵育时间，抗体孵育温度及显色时间不合适均有可能得出错误的结果。 2. 在每一次染色过程中，必须有对照实验同时进行。 3. 实验操作正常情况下，若阴性对照出现阳性染色结果，则判为假阳性，该批实验数据无效。建议重新实验或联系试剂生产厂家排查原因。 4. 如果阳性组织对照不能显示适当的阳性染色，使用者应认为该批次测试样本的结果无效。 5. 若酶标羊抗鼠/兔 IgG 聚合物孵育温度过高或孵育时间过长，可能导致染色过强及背景染色。
Limitation	本试剂仅供体外诊断使用，免疫组化作为一种多步骤的实验技术手段，组织的固定处理方式，切片厚度，试剂的选择中的任一环节的不当操作都有可能影响染色结果。同时，细胞核的不恰当的衬染强度也会影响结果的判读。任何结果的判读都必须由病理医生结合临床及组织形态学结果加以综合分析。